COMO ESCOGER UNA COLUMNA

• Propiedades físicas

Longitud de la columna.- las dimensiones más comunes son 25, 15, 10, 7.5 y 5cm. Las columnas más largas proveen una mayor eficiencia y resolución sobre las cortas; las columnas largas incrementan el tiempo de retención y la presión. Las columnas cortas (5cm) pueden dar una resolución adecuada y alta velocidad de separación y una mayor velocidad de análisis,

Diámetro interno.- los más comunes son 4.0 y 4.6mm, en estos el flujo óptimo es de 1.0a 1.25mL/min; las columnas Narrowbore (2.0 a 3.0mm) trabajan de mejor manera con un flujo de 0.2 a 0.6 mL/min, lo cual mejora la sensibilidad y disminuye el consumo de solvente; las columnas de 1.0mm (Microbore) o menores requieren de un rango de flujo entre 10 y 50 µL/min. Las columnas de diámetros internos pequeños incrementan la sensibilidad, si embargo, pueden disminuir la eficiencia y resolución.

Tamaño de partícula.- El más usado para velocidad y resolución en columnas analíticas es de 5µm. Particulas de menor tamaño, como 3µ, pueden incrementar la resolución y velocidad usando columnas cortas. La presión tiene incrementos con los menores tamaños de partícula, aunque mejora la eficiencia y no afecta la selectividad.

Tamaño de poro/ Área de superficie.- Una distribución con tamaños de poro pequeños incrementara el desempeño de la columna. El incremento en el área de superficie permite el incremento de la carga de carbono. Muestras formadas por moléculas pequeñas son mejor analizadas con partículas de 80 a 150 Å. Péptidos, proteínas y otras macromoléculas son mejor analizadas con partículas de 300 a 1000 Å. A menor tamaño de por, mayor área de superficie.

• Mecanismo químico

Fase Reversa.- Debido a su versatilidad y conveniencia, la fase reversa es la más ampliamente usada en la cromatografía de líquidos. Su compatibilidad con la mayoría de fases móviles acuosas como: Agua, Metanol y Acetonitrilo permiten separaciones de una gran variedad de tipos de muestras, tanto polares como no-polares, iónicas y solutos ionizables. La fase mas popular es la C18 (ODS, Octadecilo), otros sustratos de este tipo son C8, C4, Fenilo y Ciano.

Fase Normal.- En este tipo la fase estacionaria consiste básicamente en los siguientes sustratos: Amino, Diol, Ciano o Silica sin modificaciones. Esta técnica se utiliza principalmente para solutos que son solubles en disolventes orgánicos.

Intercambio de Iones.- La separación depende del intercambio entre la fase móvil, el sitio iónico del empaque y la muestra. En esta modalidad deben ajustarse el pH y la polaridad del solvente. Los ácidos sulfonicos y las sales cuaternarias de amonio son los grupos funcionales mas comúnmente usados.

Exclusión por tamaño.- es ampliamente usada en la separación de compuestos biológicos en fases acuosas y componentes poliméricos de fases orgánicas. La fase estacionaria de este tipo de columnas son silicas o resinas porosas. La separación se lleva a cabo por el paso de los diferentes tamaños de los componentes de la muestra a través de los poros de diferentes tamaños del empaque.